Latar Belakang : Anak usia sekolah dasar rentan terhadap berbagai penyakit yang disebabkan oleh kurangnya kepedulian anak tentang hand hygiene. Tindakan hand hygiene 6 langkah dengan sabun dan air mengalir terbukti efektif mengurangi mikroorganisme pada tangan. Pendidikan kesehatan tentang hand hygiene merupakan upaya untuk meningkatkan pengetahuan dan derajat kesehatan anak. Tujuan Penelitian : Mengetahui pengaruh pendidikan kesehatan terhadap tingkat pengetahuan hand hygiene pada anak sekolah dasar di SD Muhammadiyah Senggotan. Metode Penelitian : Penelitian ini merupakan penelitian kuantitatif pre experiment dengan pendekatan dalam satu kelompok (One-group pre-post test design). Populasi dalam penelitian ini adalah siswa-siswi kelas V di SD Muhammadiyah Senggotan yang berjumlah 34 murid. Teknik sampling yang digunakan yaitu dengan metode total sampling. Data penelitian diambil menggunakan instrumen berupa kuesioner. Analisa data dalam penelitian ini menggunakan Wilcoxon Rank Test. Hasil Penelitian : Hasil dari uji beda menunjukkan perbedaan nilai awal pre-tes dengan nilai akhir post-tes pada responden. Diperoleh hasil nilai P-value <0.05 (0.003 < 0.05) yang artinya terdapat perbedaan yang signifikan antara pre-tes dan post-tes setelah diberikan pendidikan kesehatan menggunakan metode demonstrasi dan media poster. Kesimpulan : Terdapat pengaruh pendidikan kesehatan terhadap tingkat pengetahuan hand hygiene pada anak sekolah dasar di SD Muhammadiyah Senggotan.