Latar Belakang. Program Pencegahan dan Pengendalian Infeksi (PPI) termasuk penilaian akreditasi RS. Salah satu tahap standar adalah hand hygiene. Tangan tenaga layanan kesehatan sering berkontak dengan pasien dan lingkungannya sehingga menjadi sarana yang paling lazim untuk penularan HAIs. Hand hygiene dapat menurunkan HAIs jika dilakukan dengan taat sesuai rekomendasi. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui hubungan antara tingkat pengetahuan hand hygiene dan kepatuhan pelaksanaan hand hygiene. Metode Penelitian. Penelitian ini adalah analitik observational dengan pendekatan cross sectional. Subjek penelitian adalah peserta program pendidikan profesi dokter dengan teknik pengambilan total sampling. Instrument penelitian menggunakan lembar kuesioner dan observasi. Hasil Penelitian. Analisis dengan statistik deskriptif, hasilnya didapatkan rata-rata tingkat pengetahuan dan kepatuhan pelaksanaan hand hygiene responden kurang. Analisis distribusi responden menurut jenis kelamin, responden jenis kelamin laki-laki berjumlah 17 orang dan jenis kelamin perempuan berjumlah 14 orang, distribusi menurut tingkat pengetahuan didapatkan responden dengan nilai kurang 29 orang (93,5%) dan nilai cukup 2 orang (6,5%), distribusi menurut tingkat kepatuhan didapatkan responden dengan nilai kurang 26 orang (83,9%) dan nilai baik 5 orang (16,1%). Data analisis dengan menggunakan tes korelasi antara tingkat pengetahuan dan kepatuhan pelaksanaan hand hygiene, didapatkan hasil korelasi 0,599, dimana p<0.005, maka ada hubungan positif. Kesimpulan. Penelitian ini menunjukkan terdapat hubungan positif antara tingkat pengetahuan hand hygiene dan kepatuhan pelaksanaan hand hygiene. Rata-rata tingkat pengetahuan responden kurang. Rata-rata tingkat kepatuhan pelaksanaan hand hygiene responden kurang.