Anggrek Vanda tricolor merupakan anggrek endemik Gunung Merapi yang keberadaannya terancam punah karena erupsi dan eksploitasi dari habitatnya. Salah satu upaya konservasi Vanda tricolor adalah melalui perbanyakan kultur in vitro untuk menghasilkan bibit dalam jumlah banyak dalam waktu yang relatif singkat, sehingga dapat dikembalikan ke habitat asalnya di lereng Gunung Merapi. Penelitian ini bertujuan menentukan jenis media dan konsentrasi thidiazuron terbaik untuk pertumbuhan protocorm like bodies anggrek Vanda tricolor. Penelitian ini disusun dalam Rancangan Acak Lengkap faktorial 3x3. Faktor pertama adalah jenis media (Murashige and Skoog, Vacint and Went, dan New Dogashima Medium). Faktor kedua adalah konsentrasi Thidizuron (0 mg/L, 0,5 mg/L dan 1 mg/L). Setiap perlakuan diulang 10 kali, setiap ulangan terdiri dari 1 sampel, sehingga total unit perlakuan adalah 90 unit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa protocorm like bodies memberikan respon pertumbuhan terhadap perlakuan jenis media dan konsentrasi thidiazuron, namun tidak ada interaksi antar perlakuan terhadap semua parameter yang diuji. Penggunaan protocorm like bodies sebagai eksplan menunjukkan tingginya persentase eksplan hidup (100%) dan tidak adanya eksplan yang mengalami browning maupun kontaminasi. Media New Dogashima Medium cenderung memberikan angka pertambahan diameter protocorm like bodies yang lebih tinggi (1,12 mm), persentase protocorm like bodies berdaun yang lebih tinggi (60%), dan waktu muncul akar yang lebih cepat (0,90 minggu). Konsentrasi thidiazuron 0,5 mg/L cenderung memberikan angka pertambahan diameter yang lebih besar (1,02 mm), waktu muncul tunas lebih cepat (1,46 minggu), jumlah tunas lebih banyak (1,80 tunas), dan persentase eksplan berakar lebih tinggi (70%).