Latar Belakang : Cakupan ASI eksklusif rendah pada kota Yogyakarta terdapat pada wilayah kerja puskesmas Pakualaman 10,9% dan pada kabupaten Gunungkidul terdapat pada wilayah kerja puskesmas Wonosari 2 sebesar 27,6% (DINKES DIY, 2014). Data tersebut jika dibandingkan dengan target capaian cakupan prevalensi pemberian ASI eksklusif pada usia 0-6 bulan oleh KEMENKES sebesar 80% masih jauh dari target tersebut. Pengetahuan tinggi yang dimiliki ibu tentang ASI eksklusif akan menjadi motivasi untuk ibu memberikan ASI eksklusif pada bayinya. Rendahnya angka cakupan ASI eksklusif tersebut sehingga perlu diketahui perbedaan tingkat pengetahuan ibu tentang ASI eksklusif perkotaan dan pedesaan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan tingkat pengetahuan ibu tentang ASI eksklusif di daerah perkotaan dan pedesaan. Metode Penelitian : non-eksperimental menggunakan desain penelitian deskriptif komparasi. Sampel penelitian sebanyak 45 ibu – ibu yang tinggal di wilayah kerja puskesmas Pakualaman dan 83 ibu-ibu yang tinggal di wilayah kerja puskesmas Wonosari 2 dengan teknik random sampling. Analisa data penelitian menggunakan analisa univariat yaitu frekuensi distribusi dan analisa bivariat yaitu uji Mann-Whitney. Hasil Penelitian : Tingkat pengetahuan ibu tentang ASI eksklusif di kota memiliki pengetahuan baik sebanyak 42 responden (93,3%) dan memiliki pengetahuan cukup sebanyak 3 responden (6,7%) sedangkan di desa memiliki pengetahuan baik sebanyak 71 responden (85,5%) dan memiliki pengetahuan cukup 12 responden (14,5%). Uji Mann-Whitney didapatkan hasil p=0,306 (p>0,05). Kesimpulan : Tidak ada perbedaan tingkat pengetahuan ibu tentang ASI eksklusif di perkotaan dan pedesaan.