Latar Belakang: Kehamilan merupakan salah satu faktor yang dapat menyebabkan meningkatnya masalah kesehatan gigi dan mulut, untuk itu ibu hamil dituntut untuk meningkatkan pengetahuan tentang kesehatan gigi dan mulut serta perilaku dalam mencegah masalah kesehatan gigi dan mulut. Tujuan Penelitian: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hubungan tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut terhadap perilaku pencegahan masalah kesehatan gigi dan mulut pada ibu hamil di Rumah Bersalin Handayani. Metode Penelitian: Penelitian ini menggunakan jenis penelitian observasional dengan desain penelitian cross-sectional. Penelitian ini dilakukan di Rumah Bersalin Handayani pada bulan September – Oktober 2014. Hasil Penelitian: Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan uji Spearman dengan hasil yang menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0, 001 (p < 0,05) dan koefisien korelasi sebesar 0, 506 yang berarti bahwa terdapat hubungan antara tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut terhadap perilaku pencegahan masalah kesehatan gigi dan mulut pada ibu hamil. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa semakin baik tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut, maka akan semakin baik pula perilaku dalam pencegahan masalah kesehatan gigi dan mulut pada ibu hamil. Kesimpulan: Terdapat hubungan antara tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut terhadap perilaku pencegahan masalah kesehatan gigi dan mulut pada ibu hamil.