TRANSFORMASI GENETIK KEDELAI MELALUI AGROBACTERIUM : STRATEGI PERAKITAN KEDELAI TAHAN VIRUS SMV YANG MENGEKSPRESIKAN COAT PROTEIN – SMV
Date
2004-10Author
ASTUTI, AGUNG
RINEKSANE, INNAKA AGENG
SISMINDARI, SISMINDARI
MARDIYONO, MARDIYONO
Metadata
Show full item recordAbstract
Rekayasa genetik tanaman (transgenik) merupakan suatu metode baru untuk
menghasilkan tanaman tahan virus, dengan mekanisme Coat Protein-Mediated Resistance
(CP-MR). Isolasi virus SMV isolat lokal DIY dan amplifikasi gen cp-SMV telah dilakukan
dan berhasil diklon dan ditransformasi ke Agrobacterium sp. Penelitian ini untuk
memproduksi bibit kedelai transgenik tahan virus SMV yang dilakukan dengan
transformasi gen cp- SMV isolat lokal DIY dengan metode CP-MR. Penelitian sebelumnya
telah diperoleh kalus kedelai hasil transformasi gen cp-SMV yang telah terdeteksi adanya
penyisipan gen cp-SMV menggunakan metode PCR (0,8 Kb). Tujuan penelitian ini untuk
mendapatkan planlet transforman cp-SMV kedelai, berdasarkan pengujian ekspresi coat
protein SMV. Penelitian terdiri atas beberapa tahapan yaitu : (1) Regenerasi transforman
kedelai cp-SMV (2) Isolasi coat protein SMV, (3) Analisis coat protein SMV metode
SDS-PAGE dan Immunoblotting dengan antibodi poliklonal, (3) Optimasi medium
regenerasi untuk induksi akar/tunas transforman, (4) Substitusi medium pemeliharaan
untuk multiplikasi transforman dan pre-aklimatisasi dengan pupuk daun dan air kelapa.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa regenerasi kalus atau tunas kedelai yang membawa
gen cp-SMV hanya mencapai 3 %, yaitu 6 isolat dari 200 isolat yang ditransformasi.
Diperlukan kalus seberat 2 gram untuk dapat dianalisis SDS-PAGE dengan konsentrasi 10
uM. Diperoleh konfirmasi tentang ekspresi coat protein SMV di dalam sel transforman
kedelai dengan metode immunoblottingSDS-PAGE. Medium MS + 0,5 mg/l NAA + 3
mg/l BAP + 20 % air kelapa dapat menginduksi satu tunas transforman kedelai cp-SMV.
Hyponek dan air kelapa mampu mensubstitusi unsur hara dan ZPT pada medium MS,
namun belum mampu menumbuhkan tunas dan akar dari kalus transforman kedelai.