Hipotiroid kongenital adalah hipotiroid yang terjadi sejak dalam kandungan yang ditandai dengan kurangnya produksi atau gangguan fungsi hormon tiroid. Rendahnya kadar tiroksin menyebabkan rendahnya metabolisme yang dapat mengganggu pertumbuhan dan mental. Terapi yang digunakan selama ini ialah tiroksin oral yang terbukti memperbaiki pertumbuhan otak. Gangguan metabolisme diduga dapat diperbaiki dengan mengkonsumsi ikan kembung (Rastrelliger sp) karena kaya akan kandungan omega-3, protein, zat besi, iodium, tiamin serta nutrisi lainnya. Tujuan dari penelitian ini ialah untuk mengetahui pengaruh pemberian ikan kembung terhadap memori spasial pada tikus hipotiroid kongenital induksi PTU. Metode: eksperimental murni yang dilakukan dengan rancangan post test controlled group design terhadap hewan uji. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fisiologi FK UMY. Subjek penelitian terdiri dari 30 ekor tikus galur Sprague Dawley yang dibagi secara acak dalam 6 kelompok yang terdiri dari kelompok kontrol normal, normal suplemen ikan kembung, hipotiroid, hipotiroid suplemen ikan kembung, dan hipotiroid terapi tiroksin dan suplemen ikan kembung. Hipotiroid kongenital dibuat dengan cara memberikan PTU dosis 0,025% kepada induk bunting mulai hari 5 hingga postnatal hari ke 21. Pemberian suplemen ikan kembung dengan komposisi pakan dan suplemen adalah 8:2 (20% suplemen). Memori spasial diukur menggunakan Morris Water Maze. Analisis statistik menggunakan uji Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney. Hasil: Rerata waktu retensi memori 3 hari tikus dapat menemukan platform paling cepat adalah kelompok normal suplemen ikan kembung dengan rata-rata 11,67±7,09 detik dan paling lambat pada kelompok hipotiroid dengan rata-rata 47,15±1,73 detik (p<0,05). Waktu retensi memori 3 hari pada tikus kelompok hipotiroid suplemen ikan kembung sebesar 33,92±1,29 detik menunjukkan bahwa tikus hampir menyamai kelompok kontrol normal dengan rata-rata 34,59±1,59 detik (p>0,05). Kesimpulan: Pemberian ikan kembung pada tikus hipotiroid induksi PTU cenderung memperbaiki memori spasial.