Latar Belakang: Seiring dengan berkembangnya zaman dan era globalisasi yang terjadi saat ini memberikan perubahan-perubahan dalam kehidupan yang ditandai dengan ditemukannya alat-alat praktis seperti kendaraan, telepon genggam dan komputer yang menjadi salah satu faktor penyebab kurangnya aktivitas fisik di masyarakat. Kurangnya aktivitas fisik ini dapat menyebabkan hiperkolesterolemia. Hiperkolesterolemia merupakan penyakit yang menyebabkan sebanyak 4,4 juta kematian penduduk dunia pada tahun 2002. Pola makan dan aktivitas fisik memegang peranan penting untuk mengontrol kadar kolesterol tubuh.Aktivitas fisik yang cukup dapat mencegah naiknya kadar kolesterol total. Kurangnya aktivitas fisik dapat ditemukan di beberapa orang yang bekerja dengan profesi, salah satunya pegawai swasta.Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui adanya perbedaan kadar kolesterol total pada pegawai swasta yang berolahraga rutin dan pegawai swasta yang tidak berolahraga rutin. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian kuantitatif yang dilakukan dengan menggunakan metode cross sectional. Penelitian ini dilakukan di Universitas Muhammadiyah Yogyakarta. Jumlah total responden dalam penelitian ini berasal dari karyawan UMY adalah 60 orang yang dibagi dalam 2 kelompok terdiri dari kelompok karyawan yang berolahraga rutin dan kelompok karyawan yang tidak rutin berolahraga. Kadar kolesterol total diukur menggunakan instrument Easy touch Glucose Cholesterol Uric. Analisis statistik menggunakan Mann-Whitney Test. Hasil: Nilai kadar kolesterol didapatkan bahwa untuk pegawai swasta yang berolahraga rutin nilai rata-rata adalah 174,8333 mg/ dl sedangkan untuk nilai kadar kolesterol pegawai swasta yang tidak berolahraga rutin nilai rata-rata adalah 179,5 mg/ dl. Nilai rata-rata kadar kolesterol pegawai swasta yang melakukan olahraga rutin lebih rendah dibanding pegawai swasta yang tidak berolahraga rutin. (p>0,05). Kesimpulan: Terdapat perbedaan yang tidak signifikan pada kadar kolesterol total antara pegawai swasta yang berolahraga rutin dan pegawai swasta yang tidak rutin berolahraga.