Latar Belakang: Infeksi nosokomial atau yang sekarang disebut sebagai infeksi yang berhubungan dengan pelayanan kesehatan). Cuci tangan menjadi salah satu langkah yang efektif untukmemutuskan rantai transmisi infeksi, sehingga insidensi HAIs dapat berkurang Metode Penelitian: Pengambilan sampel menggunakan teknik total sampling. Analisis data menggunakan analisis kuantitatif dengan fisher exact’s dan regresi logistik Hasil dan Pembahasan: Dari uji statistik fisher exact‟s didapatkan nilai pvalue sebesar 0,01 yang berarti terdapat hubungan antara pengetahuan dengan pelaksanaan hand hygiene dan nilai p-value sebesar 0,00 yang berarti terdapat hubungan antara fasilitas dengan pelaksanaan hand hygiene pada perawat di ruang RS PKU Bantul Yogyakarta Tahun 2018. Kesimpulan dan Saran: Faktor yang paling berpengaruh dengan pelaksanaan hand hygiene adalah fasilitas , dimana fasilitas hand hygiene yang baik berpeluang untuk membuat perawat 19,3 kali melakuakan hand hygiene yang baik pula. Manjadi masukan dan referensi guna meningkatkan kepatuhan tenaga medis dalam menerapkan hand hygiene 5 moment di lingkungan kerja RS PKU Bantul Yogyakarta.