Latar belakang: Latihan peregangan dilakukan karena dapat mengurangi potensi terjadinya hal-hal negatif yang diakibatkan oleh nyeri muskuloskeletal akibat kerja seperti kekakuan otot, tidak lancarnya transportasi zat-zat energy yang dialirkan darah seluruh tubuh yang juga dibutuhkan oleh otot-otot tubuh. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian latihan peregangan terhadap nyeri muskuloskeletal akibat kerja pada petugas kebersihan di FKIK Universitas Muhammadiyah Yogyakarta. Metode penelitian: Jenis penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah pra eksperimen dengan rancangan One group pra post test design. Teknik sampling yang digunakan pada penelitian ini yaitu purposive sampling, dengan jumlah sample 26 responden. Penelitian dilaksanakan bulan Juni 2017 di FKIK UMY. Pengumpulan data menggunakan kuesioner dan analisis data menggunakan uji normalitas Paired t-test. Hasil penelitian: Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa adanya pengaruh antara latihan peregangan terhadap nyeri otot muskuloskeletal akibat kerja pada petugas kebersihan di FKIK UMY dengan nilai signifikansi sebesar 0,000 (p<0,05). Kesimpulan: Ada pengaruh antara latihan peregangan terhadap nyeri otot muskuloskeletal akibat kerja pada petugas kebersihan di FKIK UMY.